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生化試劑，標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)照品，PCR試劑盒，?核酸檢測(cè)試劑盒，熒光定量檢測(cè)試劑盒，生化試劑盒?，比色法試劑盒，酶活性檢測(cè)試劑盒，ELISA試劑盒，酶聯(lián)免yi檢測(cè)試劑盒，試劑盒，ELISA試劑盒，抗體，重組蛋白，分光光度法檢測(cè)試劑盒，細(xì)胞株，原代細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)基，標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
熒光定量PCR熔解曲線解讀
日期：2025-04-29 07:30
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摘要：
熔解曲線的解讀：
一般來(lái)說(shuō)，根據(jù)引物設(shè)計(jì)原則，熒光定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度在80~200 bp之間，對(duì)應(yīng)的熔解溫度在80~90℃之間。
在陰性對(duì)照沒有擴(kuò)增的情況下，可以根據(jù)熔解曲線驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性：
1、熔解曲線在80~90℃之間出現(xiàn)唯1單峰，表明PCR產(chǎn)物特異性好。
2、熔解曲線出現(xiàn)雙峰，在80~90℃之間出現(xiàn)主峰，80℃以下（一般為60~75℃之間）出現(xiàn)雜峰，基本考慮產(chǎn)物中可能存在引物二聚體，可嘗試提高退火溫度、降低引物濃度、重新設(shè)計(jì)引物等方法解決。
3、熔解曲線出現(xiàn)雙峰，在80...
熔解曲線的解讀：
一般來(lái)說(shuō)，根據(jù)引物設(shè)計(jì)原則，熒光定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度在80~200 bp之間，對(duì)應(yīng)的熔解溫度在80~90℃之間。
在陰性對(duì)照沒有擴(kuò)增的情況下，可以根據(jù)熔解曲線驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性：
1、熔解曲線在80~90℃之間出現(xiàn)唯1單峰，表明PCR產(chǎn)物特異性好。
2、熔解曲線出現(xiàn)雙峰，在80~90℃之間出現(xiàn)主峰，80℃以下（一般為60~75℃之間）出現(xiàn)雜峰，基本考慮產(chǎn)物中可能存在引物二聚體，可嘗試提高退火溫度、降低引物濃度、重新設(shè)計(jì)引物等方法解決。
3、熔解曲線出現(xiàn)雙峰，在80~90℃之間出現(xiàn)主峰，90℃以上又出現(xiàn)雜峰，基本考慮有非特異性擴(kuò)增。若模板中有基因組DNA污染導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，可通過(guò)跨內(nèi)含子設(shè)計(jì)引物或去除基因組DNA等方法解決。