熱啟動PCR（hot start PCR）概述：

在傳統的PCR反應中，反應體系各成分（Taq DNA聚合酶、dNTP 和引物等）均是一次加入并進入循環，在反應溫度由室溫（25℃）上升至高溫（94～95℃）過程中，可能發生引物錯配和二聚體的形成。引物與模板中一些非靶位點的錯配和引物之間形成的二聚體，在Taq酶的作用下均可延伸，這些非特異性產物又可以在后面的PCR循環中繼續擴增，使非特異性產物不斷積累，同時，也消耗反應體系的各成分，終PCR擴增的特異性產物大大減少。熱啟動PCR(hot start PCR)是指DNA聚合酶只有在樣品溫度至少超過70℃時才發揮作用的PCR。通過這種方式控制PCR反應的必須組分DNA聚合酶，直到反應混合物被加熱到可以阻止非特異引導和引物聚合的溫度后，再啟動PCR達到有效擴增特異性PCR產物的目的。

*UNG酶通常和熱啟Taq酶一同用于建立含有UNG/dUTP防污染體系的熱啟動PCR反應系統。

UNG酶(Uracil-N-glycosylase，尿嘧啶-N-糖基化酶)的作用原理是選擇性水解斷裂含有dU的雙鏈或單鏈DNA中的尿嘧啶糖苷鍵，形成的有缺失堿基的DNA鏈在堿性介質以及高溫下會進一步水解斷裂，從而被消除。UNG酶的佳活性溫度為50℃，95℃滅活。作用：為保證PCR結果的準確性，要預防非特異性PCR擴增和污染。常用的措施是使用UNG酶（Uracil-N-Glycosylase）和Taq 酶熱啟動。PCR反應常見，重要的污染物是PCR產物，防污染熱啟動PCR試劑盒以dUTP取代dTTP，所以PCR產物都是含有dU的DNA鏈。在PCR開始前增加50℃的保溫步驟，UNG酶即可將反應體系中已有的U-DNA污染物中的尿嘧啶堿基降解，并在隨后變性這步的條件下DNA鏈斷裂，消除由于污染DNA產生的擴增，從而保證擴增結果的特異性，準確性。